生化需氧量是指微生物在特定條件下分解水中某些可氧化物質，特別是有機物的化學過程所消耗的溶解氧量。BOD5是指在20℃培養5天前后溶解氧的測量值。兩者之差為BOD5值，以氧的mg/L表示，測試范圍為2mg/l～6000mg/l。

——儀器

恒溫培養箱

20ml系口玻璃瓶

1000ml量筒

玻璃攪棒：棒的長度長于普通玻璃棒，在棒的底端固定一個直徑比量筒底小，并帶有幾個小孔的硬橡膠板。

溶解氧瓶：250ml，帶有磨口玻璃塞并且有供水封用的鐘形口。

移液管：供分取水樣和添加稀釋水用。

——試劑

磷酸鹽緩沖溶液：將8.5g磷酸二氫鉀，21.75g磷酸氫二鉀，33.4g七水合磷酸氫二鈉和1.7g氯化銨溶于水中，稀釋至1000ml，此溶液的pH值應為7.2

硫酸鎂溶液：將22.5g七水合硫酸鎂溶于水中，稀釋至1000ml。

氯化鈣溶液：將27.5無水氯化鈣溶于水，稀釋1000mL

氯化鐵溶液：將0.25g 六水合氯化鐵(FeCl3·6H2O)溶于水中稀釋至1000ml

鹽酸溶液：將40ml(=1.18mg/l)鹽酸溶于水，稀釋至1000ml

氫氧化鈉溶液：將20g氫氧化鈉溶于水中，稀釋至1000ml。

亞硫酸鈉溶液：將1.575g亞硫酸溶于水中，稀釋至1000ml。

葡萄糖-谷氨酸標準溶液：將葡萄糖和谷氨酸在103℃干燥1h后，各稱取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶內稀釋至標線，混合均勻。此標準溶液臨用前配制。

稀釋水：在5-20 L玻璃瓶內裝入一定量水?？刂扑疁卦?0℃左右，然后用無油空氣壓縮機，將吸入的空氣經活性碳吸附管及洗滌管后，導入稀釋水內曝氣2.8h。使稀釋水中的溶解氧接近飽和。放置于20℃培養箱中放置數小時。使水中的溶解氧達到8mg/l左右，臨用前每升加入氯化鈣、氯化鐵溶液。磷酸鹽緩沖液1ml，并混合均勻的PH值為7.2。其BOD5應為小于0.2mg/l.

接種液：城市污水，在室溫下放置一晝夜，取上清液使用。

接種稀釋水：分取適量接種液，加入稀釋中、混勻。每升稀釋水中接種液加入量為：生活污水1～10ml.接種液配置后立即使用。

——操作步驟

水樣的預處理

調節pH值

保持20℃的水樣溫度。

水樣測定：按照選定的稀釋比例，用虹吸沿筒壁先引入部分稀釋水于1000ml中。加入需要量的均勻水樣。再加入稀釋水至800ml，攪拌時防止出現氣泡。另外取兩個溶解氧瓶用虹吸法裝滿稀釋水作為空白試驗，測定5d前后的溶解氧。

——計算

不經稀釋直接培養的水樣：

BOD5(mg/L)=C1- C2

式中： —水樣在培養前的溶解氧濃度(mg/L);

—水樣經5d培養后，剩余溶解氧濃度(mg/L)。

——經過稀釋后的水樣計算：

BOD5=[(C1-C2)-(B1-B2)f1]/f2

式中：B1—稀釋水在培養前的溶解氧;

B2—稀釋在培養后的溶解氧;

f1—稀釋水在培養液中所占的比例;

f2—水樣在培養液中所占的比例。